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双击自动滚屏 网址:www.tjxscgt.com   编辑:admin    日期:2013/4/13 16:24:34   浏览数:
1、样品浓缩效应
1)凝胶孔径不连续性:在3层凝胶中样品胶及浓缩胶为大孔径胶,在2层凝胶中样品/浓缩胶为大孔径胶,分离胶为小孔径胶;在电场作用下,被分离物在大孔径中移动遇到阻力小,移动速度快,当进入小孔径胶时,被分离物移动受到阻力大,移动速度变慢,因而在两种胶的交界处,由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带。
2)缓冲体系离子成分及pH值的不连续性:在浓缩胶中,由于被分离物的pI介与前导离子与尾随离子的pK之间,共同向正极移动,并被浓缩成极窄的区带里。
3)电位梯度的不连续性:在不连续系统中,电位梯度的差异是自动形成的。电泳开始后,由于前导离子的迁移率最大,就会很快超过被分离物,因此在快离子后面,形成一个离子浓度低的区域,这时就有了较高的电位梯度。这种高电位梯度使后面被分离物和尾随离子在前导离子后面加快移动。当前导离子、被分离物和尾随离子的移动速度相同时,建立一种稳定状态,这时在前导离子和尾随离子之间形成一个稳定而又不断向正极移动的界面,这就是样品被浓缩的中间层。
2、电荷效应
在浓缩胶中,被分离物的各组分被浓缩,特别是在浓缩胶与分离胶的分界处被高度浓缩,形成一个狭窄的高浓度区,但进入分离胶中,被分离物中各组分所带电荷不同,而有不同的迁移率,表面电荷多,迁移快,反之则慢。因此被分离物按照电荷多少、分子量及形状,以一定顺序排列。
3、分子筛效应
分子量或分子大小和形状不同的被分离物通过一定孔径分离胶时,受阻塞的程度不同而表现出不同的迁移率,这就是分子筛效应。
经过浓缩效应后,前导离子、被分离物和尾随离子均进入分离胶中,这时胶的pH值不同,使得前导离子与尾随离子的迁移率相同,不再形成高电压,所有物质在同一、均一电压梯度下迁移。这时影响分子量大小和形状与其迁移率密切相关:分子量小并且为球型的移动快。

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